耐热大肠杆菌检测

耐热大肠杆菌检测概述

耐热大肠杆菌（Thermotolerant Coliforms）是一类能在44.5℃高温环境下发酵乳糖产酸产气的革兰氏阴性菌群，主要包括大肠埃希氏菌（E.coli）等粪便污染指示菌。作为水质、食品和环境安全的核心生物指标，其检测直接关系到公共卫生安全。这类细菌源于人或温血动物肠道，在饮用水、食品加工、游泳池等场景中的超标可能引发腹泻、败血症等疾病。全球卫生组织将其列为关键监测对象，如WHO饮用水标准要求每100ml水样中不得检出耐热大肠杆菌。随着食源性疾病频发，建立精准的检测体系对预防大规模污染事件具有重大意义。

检测项目

耐热大肠杆菌检测主要针对三大类样本：1) 水质样本（饮用水源、管网末梢水、游泳池水及废水）；2) 食品样本（生鲜肉类、乳制品、即食果蔬、海鲜及加工食品）；3) 环境样本（食品加工设备表面、餐饮器具、土壤及医疗环境）。特殊场景如灾害应急供水、婴幼儿配方奶粉生产需执行强化检测，项目涵盖定量计数（CFU/100ml）和定性筛查（存在/不存在）。

检测方法

主流检测方法分为传统培养法与分子生物学法：

多管发酵法（MPN法）：将样本接种乳糖胆盐发酵管，44.5℃培养48小时，通过产酸产气现象初筛，阳性样本转接EC肉汤复验，最后通过IMViC试验（吲哚、甲基红等）确认。该方法符合GB 5750-2022标准，灵敏度高但对操作经验要求严格。

滤膜法：样本经0.45μm滤膜过滤后，置m-FC培养基上44.5℃培养24小时，蓝色菌落即为阳性。适用于大体积水样检测，ISO 9308-1标准推荐此法。

快速检测技术：酶底物法（如Colilert®试剂）通过β-半乳糖苷酶活性使培养基变色；PCR法靶向检测uidA等特异基因，2小时内可出结果，满足US EPA 1603应急检测需求。

检测标准

全球主要检测标准体系包括：

中国标准：GB 5749-2022《生活饮用水卫生标准》规定每100ml水样不得检出；GB 4789.3-2016规定食品中限值为≤10 CFU/ml（液态产品）。

国际标准：ISO 9308-1:2014规范滤膜法操作；美国EPA Method 1603要求膜过滤法检测地表水；欧盟指令98/83/EC设定饮用水零容忍阈值。

验证要求：阳性样本需经EC肉汤44.5℃复发酵，部分标准（如APHA 9222E）要求补充吲哚试验或接种EMB平板观察金属光泽菌落。实验室需定期进行质控菌株（如ATCC® 25922）验证，确保培养温度误差≤0.5℃。